【技能实训6】精液品质检查

一、实训目标

（1）会通过外观对各种家畜的精液进行品质检查。

（2）能够利用显微镜检查各种家畜的精液，并进行品质的判断。

二、实训准备

（1）选用牛、羊、猪、马任一种新鲜精液。

（2）显微镜、显微镜保温箱或带恒温台的显微镜、载玻片、搪瓷盘、温度计、滴管、擦镜纸、纱布、蒸馏水、3％和0.9％氯化钠溶液、1/1000苯扎溴铵溶液、75％酒精、红细胞及白细胞稀释管、血（色素）吸管、血细胞计数板、5mL试管、1mL及2mL吸管、玻璃棒、染色缸、染色架、玻片、镊子、纱布。

（3）0.5％龙胆紫0.5g，96％酒精100mL。

（4）畸形精子形态图、血细胞计数板构造图及精子密度图。

三、方法步骤

（一）精液外观检查

（1）射精量。将采得的精液直接读数或倒入有刻度的试管或量杯中测量其容量。

（2）色泽、气味。观察精液的色泽，并嗅闻其气味。

（二）精子活率评定

第一种方法，采精后在22～26℃的实验室内立即检测，在37℃保温箱内检测为最佳。

在评定精子活率的同时也可测定猪、马的精子密度。

用玻璃棒蘸取1滴原精液或经稀释的精液（马、猪精液的精子密度低，不须稀释，而牛、羊精液的精子密度大，须用与精液温度相近的0.9％氯化钠溶液稀释），滴在载玻片上，加上盖玻片，无气泡存留，置于显微镜下放大200～400倍检查。检查时将显微镜载物台放平，在暗视野中进行观察。

精子的活动有3种类型，即直线前进运动、转圈运动和原地摆动。精子活率=呈直线前进运动精子数/总精子数×100％

精子活率等级的评定：在显微镜视野中估测直线前进运动精子所占全部精子的百分数。直线前进运动的精子为100％者评为1.0；90％者评定为0.9，其他以此类推。

第二种方法，除基本操作和精子密度血细胞计数法测定相同外，其不同点如下。

（1）用0.9％氯化钠溶液作为稀释液，以保持活精子正常运动。

（2）显微镜应置于37～38℃保温箱内。

（3）统计血细胞计数板计算室中5个中方格（4角＋中央）的非直线运动（包括死精子、摆动及转圈运动）精子数，求出每毫升精液中非直线运动精子数。

（4）将计数板放入120℃的干燥箱内5min，杀死全部精子，再计数4角及中央共5个中方格中的精子数，求出每毫升精液总精子数。

精子活率＝（总精子数－非直线运动精子数）/总精子数×100％

（三）精子密度测定

1.目测法

取1小滴原精液滴在清洁载玻片上，加上盖玻片，使精液分散成均匀一薄层，无气泡存留，精液也不外流或溢于盖玻片上，置于放大400～600倍的显微镜下观察，按下列等级评定。

密：在整个视野中，精子彼此间空隙很小，看不清各精子运动情况。

中：精子之间的空隙明显，能容纳1个精子。

稀：精子之间的空隙能容纳2个及2个以上精子。

2.血细胞计数法用血细胞计数板计算

1mL原精液内精子总数＝5个中方格精子数×5×10×1000×稀释倍数。

精子计数必须进行两次，如前后两次误差大于10％，则应做第三次检查。最后在3次检查中取两次误差不超过10％的平均数，即为所确定的精子数。

（四）精子畸形率检查

（1）以细玻璃棒蘸取精液1滴，滴于载玻片一端，若是牛、羊的精液，应再加1～2滴0.9％氯化钠溶液。

（2）另一载玻片的顶端呈35°，抵于精液滴上，向另一端拉去，将精液均匀涂抹于载玻片上。

（3）抹片于空气中自然干燥。

（4）用0.5％的龙胆紫酒精溶液或蓝墨水染色3min，水洗，候干后镜检。也可置于酒精固定液中固定5～6min，水洗，阴干或烘干。用蓝墨水染色3～5min，水洗，候干后镜检。

（5）镜检时，查数不同视野的500个精子，计算出其中所含畸形精子数，求出畸形精子百分率。

四、实训提示

（1）实习之前，准备好部分精液样品。

（2）简要讲明精子活率、密度、形态等的检查方法和应注意事项，然后分组进行实习。

五、实训报告

根据实训过程撰写实训报告，要包括评定精液品质的主要方法。